Rigel对PBMC细胞精确计数及活率分析

发布日期:2019-02-28 08:59:00浏览次数:351

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PBMC细胞浓度与活率分析的重要性

外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC) 即外周血中具有单个核的细胞,主要包括淋巴细胞、单核细胞、吞噬细胞、树突状细胞和其他少量细胞类型,是机体免疫应答功能的重要细胞组成。PBMC 是免疫学、抗体药物研发、传染病、恶性血液肿瘤疾病、干细胞移植、疫苗开发以及移植免疫等领域学者经常需要的研究原材料。PBMC的浓度、活力、免疫细胞亚型分布及细胞因子等都是监测机体免疫状态及其他领域研究的重要指标。所以如何精确计数PBMC细胞在科研和临床上都有重要的意义。


02

目前PBMC细胞分离、计数的方法与痛点


1.根据外周血各种血细胞的密度不相同,PBMC细胞分离方法主要密度梯度离心法,然后根据实际情况添加红细胞裂解液除去部分残留红细胞。

2.由于个体及分离效果差异,导致分离后的PBMC样本中红细胞和血小板的残留程度不同。用血球计数板在显微镜下计数是最常见的一种计数方法,由于显微镜下观察红细胞与PBMC细胞大小差异不大,肉眼很难辨别,经验丰富的操作者需通过不停调节焦距观察红细胞的双凹状的形态来区分。这个过程无疑造成了非常大的工作量及误差。

3.目前常用的计数方法包括血球计数板台盼蓝染色计数法、库尔特法及荧光细胞计数法。其中台盼蓝染色法与库尔特法均无法很好的区分红细胞与白细胞。


03

Countstar Rigel细胞分析仪对PBMC细胞精确计数及活率分析

原理: 利用AO/PI双荧光染色法进行PBMC死活细胞精确计数。吖啶橙(Acridine orange,AO)和碘化丙啶(propidiumiodide,PI)都可以对死、活细胞核中的DNA进行染色。所以该方法可以排除无核的细胞碎片、成熟的血小板及红细胞干扰,从而更准确计数PBMC细胞。


Countstar Rigel 对PBMC的计数结果

Figure1分离后PBMC细胞计数图片


Figure2分离后PBMC细胞梯度稀释后线性结果


对全血样本中PBMC细胞浓度及活率进行分析

Table 1全血样本浓度及活率重复性检测结果

Figure3全血PBMC细胞计数图

Countstar Rigel

1.快速、精确计数和活率检测
2.高重复性
3.同时拍摄明场和荧光场的图片,相结合起来验证荧光结果
4.软件系统的数据管理和控制性能完全符合GMP和FDA21 CFR Part11法规