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Countstar在肿瘤细胞的研究应用

Countstar® Rigel 全自动荧光细胞分析仪是一款基于图像法检测,配合多荧光通道,通过采集图像中的细胞信息,进行定量分析。Rigel为细胞计数,细胞活率(AO/PI,台盼蓝),以及研究细胞周期(PI),细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI)和转染效率测提供了一体化解决方案。

摘要

世界范围内癌症是主要死因之一,而新癌症治疗方法的发展具有重要意义。 癌细胞是癌症的基础研究对象,需要从癌细胞中评估各种信息。 该研究领域需要快速,可靠,简单和细致的细胞分析。 Countstar系统为癌细胞分析提供了一个简单的解决方案平台。

目录

  • 使用Countstar Rigel研究癌细胞的凋亡情况
  • 肿瘤细胞的细胞周期分析
  • 检测癌细胞的GFP转染效率
  • 细胞计数与活率测定

使用Countstar Rigel研究癌细胞的凋亡情况

细胞凋亡测定是癌细胞研究中常见的实验,用于评估细胞培养物的健康状况与一组化合物的毒性联系。细胞凋亡可以用Annexin-V- FITC和7-ADD进行检测。磷脂酰丝氨酸(PS)通常仅见于健康细胞的质膜胞内小叶中,但在早期细胞凋亡期间,膜不对称性丧失且磷脂酰丝氨酸转位至外部小叶, Annexin V可以和PS特异性结合,PI仅进入坏死/非常晚期的凋亡细胞。(图 1)

A: 早期凋亡细胞 Annexin V (+), PI (-)

B:晚期凋亡细胞 Annexin V (+), PI (+)

肿瘤细胞的细胞周期分析

细胞周期或细胞分裂周期是细胞中发生的一系列事件,导致其分裂和复制其DNA(DNA复制)以产生两个子细胞。 在具有细胞核的细胞中,如真核生物一样,细胞周期也分为三个阶段:间期阶段,有丝分裂阶段(M)和胞质分裂阶段。 碘化丙锭(PI)是一种常用于测量细胞周期的核染色染料。 由于染料不能进入活细胞,细胞在染色前用乙醇固定。 然后将所有细胞染色。 准备分裂的细胞将含有数量不断增加的DNA并显示按比例增加的荧光。 使用荧光强度的差异来确定细胞周期各个阶段中细胞的百分比。 Countstar可以捕捉图像,并可以由FCS express类流式软件进行分析。 (图2)

图2:用PI的细胞周期检测试剂盒对MCF-7(A)和293T(B)染色,结果由Countstar Rigel测量,并通过FCS类流式软件进行分析。

检测癌细胞的GFP转染效率

GFP可通过转基因技术引入肿瘤细胞中,与重组蛋白融合作为指示物,确定GFP荧光可以反映目标蛋白的表达。 Countstar Rigel 为检测GFP转染提供了一种快速简便的检测方法。 用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)染色来确定总细胞群和死细胞群以及检测表达GFP的群体。 该软件可以通过直接计数给出即时结果(包括GFP阳性百分比,浓度和活率)。 (图 4)

图4:使用Hoechst 33342(蓝色)定位活细胞,并且可以容易地确定表达GFP的细胞(绿色)的百分比。 用碘化丙锭(PI;红色)染色死细胞。

细胞计数和活率测定

双色荧光(AO/PI)可以对活细胞和死有核细胞进行染色,即使在碎片、血小板和红细胞存在下也能产生精确的存活结果。对“杂乱”和“干净”样品的精确分析,Countstar开发的双荧光计数法可以在整个样品处理步骤中的各个不同点上评估样品质量 - 从样品最初收集到分离,再到冷冻保存。 (Figure 5)

图 5: Countstar优化了双荧光染色方法,以简单,准确地测定PBMC浓度和活率。 可以用Counstar Rigel分析用AO / PI染色的样品