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干细胞治疗中细胞活率、形态和表型的测定

间充质干细胞是来源于中胚层的一类多能干细胞,因具有自我复制更新和多向分化的特点,其在医学不同的治疗领域具有很大的潜力。间充质干细胞具有独特的免疫表型和免疫调节能力。因此,间充质干细胞被广泛应用于干细胞移植、组织工程和器官移植。除此之外,在一系列基础和临床研究实验中,间充质干细胞被用作组织工程中理想的种子细胞。

摘要

Countstar® Rigel可以在干细胞的制备和分化过程中监测其浓度、活率、凋亡和表型特征(及其变化),同时可以根据明场和荧光图像记录获取整个细胞质量控制过程中的细胞形态信息,Countstar® FL为干细胞的质量控制提供了一种快速、精密和可靠的监测方法。

目录

  • 再生医学中间充质干细胞(MSC)的活率监测
  • 运输后监测MSC的形态变化
  • AdMSCs细胞表型的鉴定
  • 利用Annexin-V- FITC和7-ADD快速检测MSCs的凋亡

再生医学中MSCs浓度和活率的监测

干细胞治疗的过程

图1监测细胞疗法中使用的间充质干细胞(MSCs)的活率和数量。

干细胞治疗是再生细胞治疗中最有希望的治疗方法之一。 从收获MSC到治疗,监测MSC的浓度和活率在质量控制中起着关键作用(图1)。 Countstar® Rigel为监测MSC的浓度和活率提供了一种快速、精密、可靠的方法。

运输后对MSC形态变化的监测

图3 运输后MSC的形态变化

Countstar® Regel 同时可以测定细胞的直径和聚团情况。AdMSCs的直径在运输前后有很大的变化,运输前直径是19µm,但运输后直径增大至21µm。运输前的聚团率为20%,运输后增大至25%。从Countstar® FL拍摄的图像可以看出,运输后,AdMSCs的表型发生了巨大变化(结果见图3)。

AdMSCs 细胞表型的鉴定

分别用不同的抗体(CD29,CD34,CD45,CD56,CD73,CD105和HLADR)孵育AdMSCs,通过Countstar® Rigel测定AdMSCs的免疫表型。CD105的结果见图1。

利用Annexin-V- FITC和7-ADD快速检测MSCs的凋亡

简介

细胞凋亡可以用Annexin-V- FITC和7-ADD进行检测。磷脂酰丝氨酸(PS)通常仅见于健康细胞的质膜胞内小叶中,但在早期细胞凋亡期间,膜不对称性丧失且磷脂酰丝氨酸转位至外部小叶。 (A)MSCs凋亡检测的荧光图像 (B)通过FCS软件分析得到的MSC凋亡散点图 (C)正常细胞、凋亡细胞、坏死或极晚期凋亡细胞的百分比。