Counstar Rigel S3在免疫治疗领域的应用

免疫疗法，如CAR-T治疗包括从病人收集外周血单核细胞（PBMC），然后分离所需的T细胞亚群，通过基因改造产生工程CAR-T细胞，CAR-T细胞在体外大规模扩增后再回输到患者。 Countstar Rigel S3系统可以对整个CAR-T生产过程中细胞浓度，活率进行监测，并且符合GMP的要求。

AO/PI双荧光法检测活率：

吖啶橙和碘化丙啶是可以和细胞核核酸结合的荧光染料。AO可以穿透活细胞和死细胞对细胞核进行染色并发出绿色荧光，PI进入死细胞对细胞核进行染色并发出红色荧光。因此AO/PI为细胞核染料，可以准确区分活细胞与死细胞，而且可以排除杂质或者非特异细胞的干扰，进行精准的浓度活率检测。

AO/PI双荧光染色法PBMC细胞图像

细胞凋亡：

细胞凋亡的测定是通过测量细胞早期凋亡激活的标记来了解细胞如何死亡。 这些是凋亡细胞的特定生物化学和形态学标记，而在正常细胞和坏死细胞中不发生的此变化。 使用Countstar FL通过Hoechst 33342，Annexin V-FITC，PI标记细胞, 可以将细胞分成不同的阶段。 该Counstar软件可以通过直接计数提供即时结果。

图 4 K562靶细胞与效应细胞混合培养3h 后，Hoechst 33342，CFSE，PI染色的荧光图像

GFP转染

GFP可通过转基因技术引入动物细胞或其他微生物。 Countstar Rigel S3为检测GFP转染提供了一种快速简便的检测方法。 用Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）染色来确定总细胞群和死细胞群以及检测表达GFP的群体。 该软件可以通过直接计数给出即时结果（包括GFP阳性百分比，浓度和活率）。

图 9使用Hoechst 33342（蓝色）定位活细胞，并且可以容易地确定表达GFP的细胞（绿色）的百分比。 用碘化丙锭（PI;红色）染色死细胞。