发布日期:2020-02-28 10:09:02浏览次数:7487
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新冠病毒肺炎患者的检测和确诊
本次冠状病毒感染的潜伏期一般为3-7天,最长可达14天,出现发热不退、乏力和干咳等症状的患者,需要到定点医院进行诊治,一般从问诊到确诊需要经历以下6步,见下图。首先是预检分诊,这一步主要是咨询一些流行病史和填写相关表格,这一步对于后期的诊治判断以及疫情过后的流行病调查很重要。接着就是测量体温,如果有发烧的症状需要到发热门诊进行问诊,问诊之后将进行验血和影像学的检查(主要是CT),如果流行病学史和临床检查(包括影像学)的表现都符合,将会被初步判断为疑似病例。
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核酸检测试剂盒
新型冠状病毒是一种RNA病毒,病毒中特异性RNA序列是区分该病毒与其它病原体的标志物。新型冠状病毒出现后,我国的科学家团队在非常短的时间里完成了对新型冠状病毒全基因组序列的解析,并通过与其它物种的基因组序列对比,发现了新型冠状病毒中的特异核酸序列。通过对患者呼吸道样本和血液样本进行检测,可以甄别出新型冠状病毒阳性的患者,进而确诊。基于以上原理,包括上海之江生物在内的多家企业,紧急攻关,在极端的时间内就研制出了用于检测新型冠状病毒的核酸检测试剂盒,并经国家加紧审批后,上市量产。下图是目前国内上市的新型冠形病毒检测试剂盒的企业。
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核酸检测试剂盒的检测流程
对患者的病人进行核酸检测,一般需要进行以下几个流程。首先是病人标本的采集,本次新型冠状病毒可供检测的标本包括:上呼吸道标本,下呼吸道标本,血液标本和血清标本等。采集方法有咽拭子,鼻拭子,鼻炎呼吸道抽取物,吼支气管灌洗液以及血液血清提取等,其中咽拭子和鼻拭子是较为简单和常用的采取方法,但是存在提取物中病毒含量低的问题;标本提取后,需要进行的是标本的保存和运输,对于24小时内检测的标本,可4℃保存,若无法在24小时内检测,需在-70℃或液氮内保存,以避免RNA降解;第三步是对病人样本进行核酸的抽提,以提取标本中的病毒核酸,并将提取的核酸进行浓度和纯度检测;第四步需要利用逆转录酶将RNA逆转录为DNA,三四步操作都需使用无RNA酶的器具耗材,以避免RNA降解;最后一步则是利用特异性的引物和Taqman荧光探针在荧光定量PCR仪中进行病毒核酸含量的相对定量检测,本次新型冠状病毒常用的引物和探针见下图。荧光量达到阈值的CT值,将被作为判断新型冠状病毒是否感染的标准,一般情况下,若Ct值大于40或无CT值(NA),则结果为阴性,若Ct值<37,则认定结果为阳性,若Ct值介于37和40之间,则结果为可疑的,可能是本底的核酸背景,也有可能是核酸提取的问题,需要重新进行检测。不同公司的产品,可能对于阳性标准的判定会略有不同,但都基本依据Ct值的大小。
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检测新冠病毒仍存在的一些问题