Countstar Rigel与细胞治疗

发布日期:2019-04-30 11:29:00浏览次数:170

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细胞免疫治疗概括

细胞治疗是将正常或生物工程改造过的人体细胞移植或输入患者体内,新输入的细胞可以替代受损细胞、或者具有更强的免疫杀伤功能,从而达到治疗疾病的目的。细胞治疗在治疗癌症、血液病、心血管病、糖尿病、老年痴呆症等方面显示出越来越高的应用价值。

2018诺贝尔医学和生理学奖 ,依然授予了热门多年的肿瘤免疫疗法!获奖者为美国科学家James P.Allison(詹姆斯·艾利森)和日本科学家Tasuku Honjo(本庶佑)。自1908年,俄国科学家梅切尼科夫(获诺贝尔生理医学奖),发现巨噬细胞和小噬细胞可以清除病原菌,被誉为"细胞免疫之父"。此后,诺贝尔奖就格外钟情"细胞免疫学",先后18次获奖。如:随着抗体基因重排规律的解释(1987年诺奖)及 "树突状细胞"功能的研究(2011年诺奖)等。这背后是百年来细胞免疫学理论不断突破,以及取得临床价值的必然结果!



一张图看清细胞治疗


 图1 细胞治疗总况


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肿瘤常规治疗的局限性与细胞治疗的优势


图2 肿瘤常规治疗的局限性


图3 细胞治疗的优势


肿瘤常规治疗有局限性,但与细胞治疗相结合,能发挥出1+1>2的效果优势:

1.手术后迅速采用细胞免疫疗法,就会避免肿瘤细胞复发和转移,并且无副作用,不会对身体带来伤害,提高病人的生存质量和生存期。

2.放射治疗对于许多癌症可以产生较好效果。但放疗多是局部治疗,对抑制肿瘤细胞的转移作用不大,且放射线对免疫器官、免疫细胞都有明显的损害。

采用放疗联合CIK细胞治疗技术就能与放疗取长补短,提高放疗的疗效,有效杀伤癌细胞,防止肿瘤转移与复发,同时减轻患者放疗后的并发症,延长生存期,提高生活质量。

3.化疗抗肿瘤药进入人体后能很快分散到全身,既可杀死局部的癌细胞,也能杀死转移的癌细胞。不过这种治疗方法有很大的缺陷,表现在化学药物对杀灭癌细胞并无特异性,杀灭癌细胞的同时也杀死正常细胞,对肿瘤患者的免疫系统是极大打击,过度化疗会缩短患者的生存时间,部分肿瘤对药物不敏感,采用化疗没有临床价值。由于肿瘤干细胞对化疗药物不敏感,在一定的时间内癌细胞还会复发和转移。

  采用化疗和细胞免疫联合疗法,可以有效地弥补不足,CIK细胞不但能直接或间接杀伤清除肿瘤细胞,还可以降低化疗的毒副反应,重建患者的免疫系统功能,提高生活质量,延长生存期,增强化疗药物的敏感性,提高化疗疗效,防止肿瘤的转移与复发。


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细胞治疗的以期达到的理想结果

a.使肿瘤细胞逆转为正常细胞

b.选择性使肿瘤细胞凋亡或死亡而不损伤正常细胞

c.获得最佳的治疗指数(Therapeutic index)

    治疗指数=治疗有效率/毒副作用

传统治疗手段很难达到最理想化的治疗指数


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以CIK细胞制备为例,说明Rigel在细胞治疗中的应用

 图4 CIK细胞制备流程示意图

此CIK细胞制备周期为13天,第1/4/5/10/13都要进行细胞计数及活率测定,第10天要进行真菌、细菌、内毒素、支原体,β-葡聚糖,CD3,CD8,CD56的表型分析,第13天要对留样做表型分析等一系列的质控操作。

1. 细胞计数及活率测定

常规实验的PBMC计数和活率测定是一个复杂和不确定的过程。Countstar ® Rigel可以精确计数分离后的PBMC以及活率分析。

图 5AOPI染色原理


常规的PBMC细胞活率检测依赖于PBMC细胞的纯化和分离。

Countstar® Rigel可用荧光染料为血液样本直接染色进行图像分析获得数据,使细胞分离不再是必须。Countstar® Rigel对CIK细胞第一天的血液样本双荧光染色,计数,得到总的PBMC总数。

对分离后的PBMC再计数,便可知实验操作者分离PBMC的得率,若损失严重,具体寻找原因,是操作者手法还是淋巴细胞分离液影响,对症下药,避免实验失败有很好的指导意义。

双荧光法准确区分密度梯度离心后PBMC的活率,有效排除干扰物质对细胞计数的影响:


2. 细胞表型分析-CD maker检测

CD maker的测定是免疫细胞治疗很有参考价值的指标。

Countstar® Rigel提供了更为快速和操作简便的方法使细胞分型工作更加高效。通过可见的细胞图像和强大的数据分析功能,不需要大量复杂的对照设置及荧光补偿调整,即可获得稳定可靠的结果。

PBMC经CD3-FITC, CD56-PE抗体染色后的视野图:

Countstar® Rigel创新的图像识别与类流式分析技术,针对GMP及FDA标准要求设计,为您提供便捷、可标准化的操作流程,助您建立有一个稳定、标准的细胞质控体系。

1.桌面型小仪器,20μL样本,触屏操作,20s得到细胞质控结果;

2.数据结果准确,可与流式对比;

3.荧光染色,准确快速,省时省力;

4.按照GMP、cGMP和FDA数据存储、电子签名要求的规范设计,保证信息来源可靠,可追溯;

5.图像+数据,结果真实可见;