Countstar Rigel 全自动荧光细胞分析仪在细胞杀伤实验中的应用

发布日期:2019-04-23 11:25:00浏览次数:115

Countstar Rigel 全自动荧光细胞分析仪是一款基于图像法检测,配合多荧光通道,通过采集图像中的细胞信息,进行定量分析。它将荧光显微成像与统计学群体分析结合于一身,既能提供细胞群的统计数据,又可以获得单个细胞的图像,从而提供细胞形态学信息。独特的图像采集系统同时产生明场以及四张荧光图像,让实验结果更为直观。

Rigel在细胞杀伤实验中的应用


方法一(双染法):


收集靶细胞,细胞个数为4*107个;将细胞浓度调至为1×106/mL,向细胞溶液中CFSE溶液(根据目前测试使用的浓度要求),并在37℃,5%CO2培养箱中间歇混合孵育30分钟;300g离心3分钟,去除上清,加入PBS清洗一遍;300g离心3分钟,去除上清,加入约18mL含血清培养基,测试细胞浓度至2*106个/mL;向12孔板中种入1×106个靶标细胞/孔(约500ul靶标细胞),按效:靶比例(E:T比率)分别为5:1,1:1和0.5:1,每孔加入相应数量的效应细胞,即效应细胞个数5×106,1×106和0.5×106(若原效应细胞浓度为1*107/mL,则分别加入效应细胞500ul,100ul, 50ul,并用培养基定容至每孔终体积为1mL),每个组重复3个孔。同时,仅含培养基和细胞的组作为对照组。注:每个孔的终体积用培养基定容至1ml。(以上细胞数目均可以减少10倍,使用96孔板进行测试,定容体积时定容至100ul)以上实验,分别在加入效应细胞4h后进行细胞收集;取出细胞悬液,100微升体积细胞悬液中加入1微升PI染色液;吹打均匀,吸取20微升体积至样品板,用Countstar Rigel对应的Cytotoxicity实验程序进行检测。

测试结果:

图1. 细胞杀伤结果,效:靶比例(E:T比率)分别为5:1,1:1和0.5:1和control组的细胞杀伤率分别为为0%,6.25%,26.39%,77.78%。

图2. 细胞杀伤结果,效:靶比例(E:T比率)分别为5:1,1:1和0.5:1和control组的细胞杀伤荧光图。

表1. 效:靶比例(E:T比率)分别为5:1,1:1和0.5:1和control组的活细胞个数和浓度。


方法二(三染法):


测试结果:

图3. Hoechet 33342染所有的活细胞包括T细胞和肿瘤细胞,CFSE染肿瘤细胞,PI染所有的死细胞,通过不同细胞的荧光数量直接计数,从而直观得到细胞杀伤率。

E: T Ratio dependent Cytotoxicity ofK562

图4. 不同效靶比的细胞,细胞杀伤荧光图。


Rigel在细胞杀伤实验中的优势

  • Countstar Rigel利用图像法进行细胞杀伤检测,可避免荧光素无法完全释放,离心等引入的检测误差,结果稳定性较好,检测结果与预期一致;

  • 所需效靶细胞量较FCS少,更加节约样本量;

  • 20μl完成检测,细胞和试剂耗费少,成本低;

  • CD maker检测简捷快速,无需流式专人维护、无需清洗养护;

  • 精细到单个细胞的图像和参数输出,让计数结果清晰可见;

  • 按照GMP、cGMP和FDA数据存储、用户管理、电子签名要求的规范设计,保证信息来源可靠、可追溯,可提供GMP认证相关3Q验证服务;

  • 可通过局域网连接服务器,实施上传检测结果,数据更安全。

 

Rigel在细胞实验中的优势

  • Countstar Rigel对细胞能进行精确的计数和活率测试,可对结团细胞进行精准分割和计算,测试结果具有很好的稳定性和重复性;

  • Countstar Rigel可准确而对PBMC/全血样品中有核细胞进行检测,测试浓度与血细胞分析仪一致;

  • Countstar Rigel可进行常规的细胞周期、细胞凋亡实验,提供了准确的荧光定量结果,自动化程序,非常方便用户完成成像到数据采集;

  • Countstar Rigel基于CCD成像的原理,高质量图像有极好的信噪比,可导出原始图片,自动化程序,方便用户完成成像到数据的采集。