PBMC检测新方法 ——Countstar助力免疫学研究发展

发布日期:2017-10-30 11:36:00浏览次数:173

PBMC是指外周血中具有单个核的细胞,包含淋巴细胞、单核细胞等,常用于免疫学领域的科研活动(包括自身免疫性疾病),传染病,血液恶性肿瘤,疫苗开发,移植免疫学和高通量筛选。作为免疫学功能研究中最常用的细胞模型,PBMC在免疫学研究以及免疫治疗领域发挥至关重要的作用。


传统的PBMCs血球计数板方法往往存在操作繁琐,耗费时间长等问题,再加上个体(如正常人和病人)和人工分离提取的差异,以及红细胞和血小板污染的程度差异,这都大大增加了准确计数PBMC和检测 PBMC活性的难度。


近日Countstar FL细胞荧光分析仪通过层层筛选,成功斩获了三家来自广东的细胞免疫学研究单位的订单。而 Countstar FL之所以受到的青睐,除了它能对PBMC细胞进行准确稳定的检测,还可通过其独特的荧光图像成像系统,让您可以“看”到细胞。



由于红细胞的存在,使得PBMCs测定的结果受到干扰。通常情况下需要通过2种方式去除红细胞的干扰:1. 将红细胞裂解去除红细胞;2. 密度梯度离心方法去除红细胞。


Countstar FL提供了一种更加简便和准确的PBMCs的分析方法,可是使用户在不裂解红细胞的情况下即可对PBMCs进行分析。


活死单个核细胞可呈现荧光信号。而成熟的红细胞及血小板,因为没有细胞核,不能被AO/PI染色,因此可以完全被排除在外不被计数。可以精确计数分离后的PBMC以及活力分析。  


虽然有研究者使用2种方法的组合来去除红细胞,但是同样被证明无法完全去除红细胞。现在的研究者在PBMCs研究中遇到的挑战:研究者们依然在使用传统的血球计数板分析PBMCs细胞;在分析的时候会PBMCs会受到红细胞的干扰;红细胞仅能用肉眼识别,并且需要有一定经验的实验者;


血细胞经PBS稀释后,在明场条件下,因为有大量的红细胞,血浆等干扰,无法进行计数,双荧光法可明显识别PBMC。



梯度稀释后测定PBMCs浓度

血细胞,用PBS稀释不同比例(1:5,1:10,1:15,1:20,

1:25),使用AO/PI染色方法染色并在Countstar仪器上进行检测。结果如图所示。经过稀释后,可以看到检测结果拥有良好的线性。



双荧光法对密度梯度离心法获得PBMC进行计数


双荧光法可准确区分密度梯度离心后PBMC的死活,并有效排除干扰物质对细胞计数的影响    


双荧光法对密度梯度离心法获得PBMC进行计数